受激发射耗尽显微镜又称受激发射损耗显微镜,简称STED显微镜,是一种基于荧光共聚焦成像的超高分辨率技术。STED显微镜超越了光学显微镜的传统限制,可以实现纳米级别的高分辨成像,分辨率可达分子大小。
STED显微镜基本原理是采用两束中心重合的激光照射样品,使中心区域的荧光分子自发辐射荧光,以压缩PSF尺寸,从而获得超衍射极限的荧光发光点。STED显微镜用标记材料包括荧光染料、荧光蛋白、荧光探针等,包括NBD-X、Alexa 488、iRFP、mNeptune2等。
STED显微镜是在共聚焦显微镜的基础上改造而来,主要由激发光路、探测光路、损耗光路三条光路组成的,其中激发光路用于激发样本荧光标记,探测光路用于探测收集辐射荧光,损耗光路用于提供中心处强度为零的环形损耗光束。激发光路、探测光路、损耗光路均会受到样本像差的影响,在三条光路中,损耗光束的像差对STED显微镜的分辨率、成像质量影响最大。
根据新思界产业研究中心发布的《
2024-2029年中国受激发射耗尽显微镜(STED)行业应用市场需求及开拓机会研究报告》显示,STED显微镜搭建理论于1994年提出,经过30年的发展,STED显微镜逐渐从从单色STED显微镜发展为多色STED显微镜,与此同时,自适应光学(AO)技术的引入、标记技术的发展,使得STED显微镜在高分辨成像、成像维度等方面也取得了显著的进展。
STED显微镜是超高分辨率显微镜的代表之一,具有超高分辨率成像、光毒性较低、光漂白性较低等特点,适用于长时间观察活体样本,在活细胞成像、多荧光标记、生物医学研究、材料科学、神经科学等领域应用空间广阔。
全球范围内,STED显微镜相关企业包括Abberior公司、德国蔡司、中国科学院苏州生物医学工程技术研究所、杭州柏纳光电有限公司等。我国超分辨光学显微镜市场由国外企业垄断,但在国产替代背景下,我国企业在该领域取得了多项成果,如中国科学院苏州生物医学工程技术研究所已经研制出双光子显微镜、STED超分辨显微镜、双光子-STED显微镜等超分辨光学显微镜。
新思界
行业分析人士表示,STED显微镜是超高分辨率显微镜代表之一,在细胞生物学、神经科学、材料科学等领域应用广泛,随着市场对样本可观察的分子尺度要求提升,STED显微镜应用空间将持续扩大。近年来,STED显微镜技术及应用得到了长足发展,但其也存在成本高、样品要求高、操作难度较大等问题,一定情况下限制了其应用扩展。
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