cRNA探针,是以cDNA为模板,通过体外转录获得cRNA制备而成的一种单链探针,是一种核酸探针,属于RNA探针。
cRNA探针的制备过程是,从组织或细胞中提取mRNA,经逆转录作用获得cDNA,对cDNA进行克隆并连接到载体上,以克隆的cDNA为模板,以含有标记物的核苷酸为原料,进行体外转录产生cRNA。在此过程中,cRNA的转录方向可以控制,能够获得带有标记物的与mRNA同序列的同义cRNA探针,或者与mRNA互补的反义cRNA探针。
cRNA探针的工作原理是,利用cRNA探针与样品核酸分子进行杂交,若样品中含有与cRNA探针互补的核酸序列(即目标核酸序列),则二者相互作用通过氢键紧密相连形成双链,洗去未杂交的多余cRNA探针,基于标记物的自显影或者发光作用对样品进行检测,获得目标核酸序列相关信息,即利用与cRNA探针检测出与之互补的核酸序列。
采用cRNA探针杂交形成的双链稳定性高,不会受RNA酶影响,而cRNA探针本身对RNA酶敏感,会被破坏,因此可以利用RNA酶来清除未杂交的多余cRNA探针,以排除干扰,便于后续对样品进行探测观察。
cRNA探针可应用范围广泛,包括检测同种基因在不同条件下的表达水平、协助注释未知基因组区域、研究基因组复制机制、检测病毒的存在以及含量等。例如,利用地高辛标记的cRNA探针,在胰腺切片上进行原位杂交,可用来检测胰岛素基因表达产物mRNA,结果可靠性高。但cRNA探针制备过程较为复杂,对实验设备、试验环境、实验人员技术要求较高。
新思界
行业分析人士表示,与欧美国家相比,我国基因研究起步较晚,但发展迅速,部分技术已经达到或接近国际先进水平。同时,为实现疾病早发现、早治疗以及精准治疗,我国基因测序行业迅速崛起,特别是高通量测序(NGS)发展速度快,倒推基因研究技术不断进步。在此背景下,我国市场对核酸探针需求不断增长,cRNA探针作为核酸探针的一种,未来市场前景良好。